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常用蛋白质沉淀方法有哪些?

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常用的蛋白质沉淀方法包括以下几种:

盐析法

原理:通过在蛋白质溶液中加入大量的盐(如硫酸铵、硫酸钠或氯化钠),破坏蛋白质胶粒的水化层,中和其所带电荷,使蛋白质因失去稳定因素而沉淀。

优点:沉淀的蛋白质保持其天然性质,可再度溶解而不变性。

缺点:沉淀的蛋白质中混有大量中性盐,需通过透析除去。

等电点沉淀法

原理:利用蛋白质在不同pH值下的等电点(pI)进行沉淀。在等电点时,蛋白质带净电荷为零,因此容易形成沉淀。

应用:适用于不同蛋白质的分离纯化。

有机溶剂沉淀法

原理:使用有机溶剂(如乙醇、甲醇、丙酮等)破坏蛋白质胶粒的水化膜,使蛋白质因失去水化层而沉淀。

特点:适用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化,有时也用于蛋白质沉淀。低温操作可减缓蛋白质变性。

重金属盐沉淀法

原理:利用重金属离子(如Ag⁺、Hg²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺等)与蛋白质的负离子结合,形成不溶性蛋白质沉淀。

应用:常用于临床急救,如重金属盐中毒的治疗。

生物碱试剂与某些酸沉淀法

原理:利用生物碱试剂(如苦味酸、鞣酸、钨酸等)或某些酸(如三氯醋酸、磺酸水杨酸、硝酸等)与蛋白质的正离子结合,形成不溶性的盐沉淀。

条件:通常在pH值低于蛋白质的等电点时进行。

这些方法根据具体需求和实验条件选择使用,以达到最佳的蛋白质沉淀效果。